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sgrna设计网站直播_sgrna如何设计(2024年11月全新视觉)

内容来源：东为网络所属栏目：导读更新日期：2024-11-28

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sgRNA设计及活性检测虚拟仿真软件根据 CRISPR/Cas9 基因编辑技术的特点，利用计算机虚拟现实技术，通过三维重建和模拟实验等技术手段，建立了sgRNA设计及活性检测虚拟仿真软件。学生可通过该软件学习 CRISPR/Cas9 基因编辑技术的技术原理、应用范围，从而掌握这一最前沿的分子生物学实验技术。北京欧倍尔虚拟仿真的微博视频

CRISPR/Cas9基因编辑全流程详解你知道CRISPR/Cas9技术吗？这是一种强大的基因编辑工具，能够在特定DNA位点进行精准编辑。今天，我们来详细讲解CRISPR/Cas9的原理和操作步骤，帮助你更好地理解这项技术。 𐟔 原理 CRISPR/Cas9技术的核心是CRISPR（成簇的规律间隔的短回文重复序列）和Cas9（CRISPR相关蛋白9）两种成分。CRISPR是一段特殊的DNA序列，用于记录病毒入侵的历史，并通过间隔序列存储病毒的DNA片段。Cas9则是一种核酸酶，能够在特定DNA序列上切割双链DNA。在基因编辑过程中，研究人员首先设计一条与目标DNA序列互补的单链RNA引导分子（sgRNA）。这条sgRNA能够携带Cas9蛋白，通过碱基互补配对的方式精确找到目标DNA序列。一旦定位成功，Cas9蛋白就会在sgRNA的引导下切割目标DNA双链，产生DNA双链断裂（DSB）。细胞在修复这些DSB时，可以通过两种主要机制进行：非同源末端连接（NHEJ）和同源定向修复（HDR）。在没有同源模板的情况下，NHEJ机制会被激活，导致目标基因被删除或产生插入/缺失突变，从而实现基因的敲除。而HDR机制则允许在DSB处外源DNA模板，实现精确的基因插入或替换。 𐟛 ️ 操作步骤设计sgRNA 选择目标基因中的合适靶点序列。使用专门的软件（如CRISPRDesign Tool）设计sgRNA序列，确保其具有高度的特异性和准确性。制备sgRNA 通过体外转录技术或化学合成方法制备sgRNA。验证sgRNA的纯度和完整性，通常使用凝胶电泳等技术进行。构建CRISPR/Cas9系统将Cas9编码序列和sgRNA序列克隆到适当的载体中，如质粒或病毒载体。确保CRISPR/Cas9系统能够在细胞中稳定表达。转染细胞使用基因转染、电穿孔或病毒介导转导等方法将CRISPR/Cas9系统导入目标细胞。根据细胞类型和转染效率选择合适的转染方法。筛选和鉴定基因编辑细胞使用特定的筛选标记（如荧光蛋白或抗生素抗性基因）富集成功转染的细胞。通过分子生物学方法（如PCR和测序）验证目标基因的编辑情况。筛选出具有目标基因敲除、插入或替换的细胞克隆。功能验证研究编辑后细胞的表型变化和功能影响，如细胞增殖、分化、迁移等。使用流式细胞术、Western Blotting（WB)或免疫组化等技术检测目标蛋白的表达情况。 CRISPR/Cas9技术通过精确识别和切割目标DNA序列，结合细胞自身的修复机制，实现了对基因的敲除、插入或替换。其操作方法包括设计sgRNA、制备CRISPR/Cas9系统、转染细胞、筛选和鉴定基因编辑细胞以及功能验证等步骤。这一技术为基因编辑领域带来了巨大的变化，并在微生物工程等领域展现出广阔的应用前景。

CRISPR/Cas9攻略，科研必备！听说大年三十还在刷科研帖的朋友，来年实验都会顺利哦！𐟎‰ 一、实验原理基因敲除：CRISPR/Cas9系统通过Cas9酶切割靶基因组，形成DNA双链断裂。通常情况下，细胞会通过非同源末端连接（NHEJ）方式修复断裂的DNA，修复过程中可能发生碱基插入或缺失，导致移码突变，从而使靶标基因失去功能，实现基因敲除。基因敲入：CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列，进行切割。sgRNA识别并结合目标基因的靶向序列，形成RNA-DNA杂交，激活Cas9酶。Cas9酶作为DNA剪切酶，相对准确地切割目标DNA序列，donor DNA通过同源重组（HDR）将外源基因整合到切割位点，实现对基因组的编辑。二、实验步骤设计sgRNA：根据实验需求设计合适的sgRNA序列。合成sgRNA：将设计好的sgRNA序列进行合成。表达Cas9和sgRNA：将Cas9和sgRNA进行表达，通常通过载体进行。切割目标基因：利用Cas9酶切割目标基因序列。筛选单克隆：通过筛选获得含有编辑基因的单克隆细胞。基因编辑结果验证：对基因编辑结果进行验证，确认编辑成功。通过以上步骤，你可以实现对基因组的精准编辑，为科研实验提供有力支持。𐟔찟’က

CRISPR筛选引领遗传干扰研究的新浪潮

CRISPR/Cas9攻略，科研必备！听说大年三十还在刷科研帖的朋友，来年实验都会顺利哦！一、实验步骤设计sgRNA 𐟓 首先，你需要设计出能够精准识别目标基因的sgRNA。这个过程需要一定的生物信息学知识，确保你的sgRNA能够有效地与目标序列结合。合成sgRNA 𐟧슨彤𙋥Ž，接下来就是合成sgRNA。这一步通常需要专业的生物技术公司来完成，确保合成的准确性。表达Cas9和sgRNA 𐟒‰ 将设计好的sgRNA与Cas9蛋白一起表达，这是基因编辑的关键步骤。你需要构建一个能够同时表达Cas9和sgRNA的载体，并将其导入到细胞中。切割目标基因 ✂️ 一旦Cas9和sgRNA进入细胞，它们就会识别并切割目标基因。这个过程是基因编辑的核心，切割的准确性直接影响到后续的实验结果。筛选单克隆 𐟔 切割完成后，你需要筛选出那些被成功编辑的细胞。这一步通常通过PCR或其他分子生物学技术来完成，确保你得到的是编辑成功的单克隆。基因编辑结果验证 ✅ 最后，你需要验证基因编辑的结果。这可以通过测序或其他分子生物学方法来完成，确保你的基因编辑是准确无误的。二、实验原理基因敲入 𐟔犥œ胒ISPR/Cas9系统中，sgRNA识别并结合目标基因的靶向序列，形成RNA-DNA杂交。Cas9酶作为一种DNA剪切酶，可以相对准确地切割目标DNA序列。随后，donor DNA通过同源重组（HDR）的方式将外源基因整合到这个切割位点上，实现对基因组的编辑。基因敲除 ✖️ Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂。通常情况下，细胞会采用高效的非同源末端连接方式（NHEJ）对断裂的DNA进行修复。在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象，造成移码突变，使靶标基因失去功能，从而实现基因敲除。希望这篇指南能帮助你更好地理解CRISPR/Cas9基因编辑技术，祝你实验顺利！

CRISPR-Cas9基因编辑全解析今天，我想和大家聊聊一个超级酷的技术——CRISPR-Cas9基因编辑系统。准备好了吗？Let's go！ 𐟌Ÿ CRISPR-Cas9系统的核心组件首先，让我们来了解一下CRISPR-Cas9系统的核心组成部分。最常用的Cas9蛋白来自一种叫sp的细菌。这个蛋白就像一把分子剪刀，可以在基因组的特定位置切断DNA双链。接下来是sgRNA，也就是引导RNA。它是由两部分组成的： 𐟓 crRNA：大约20个碱基长，与目标DNA序列精确互补，决定了Cas9的切割位置。 𐟓 tracrRNA：与Cas9蛋白结合，确保sgRNA与Cas9形成稳定复合物。最后，还有一个PAM序列，这是Cas9切割的必要条件。Sp的Cas9识别的PAM是5'-NGG-3'（N表示任意碱基）。目标DNA中必须在靶序列下游存在PAM序列，否则Cas9无法切割。 𐟌Ÿ CRISPR-Cas9基因编辑的步骤选择编辑位点 𐟎斥…ˆ，你需要选择一个基因组中需要修改的区域，并设计与该区域互补的sgRNA靶序列。然后确定PAM序列的位置，选择的靶序列必须靠近PAM序列，以确保Cas9能在正确位置切割。形成sgRNA与Cas9复合物 𐟧슳gRNA可以在体外合成或在细胞内表达。sgRNA和Cas9蛋白结合形成复合物，并准备寻找靶标DNA。识别与结合DNA 𐟔 sgRNA与基因组中的目标序列互补配对（通常是20个碱基的长度）。Cas9蛋白会扫描DNA，寻找与sgRNA互补的序列。当找到靶序列并确认其附近有PAM时，Cas9会与该区域结合。切割DNA双链 ✂️ 当Cas9与靶DNA结合后，Cas9的两个切割活性位点（HNH和RuvC结构域）会分别切断DNA双链。HNH结构域切割与sgRNA互补的DNA链，而RuvC结构域则切割另一条非互补链。结果是DNA双链被切断，产生一个双链断裂（DSB）。修复DNA断裂 𐟛 ️ 细胞有两种方式来修复DNA断裂：非同源末端连接（NHEJ）：这是细胞对DNA断裂的快速修复途径，直接将断裂的DNA片段连接在一起。修复过程中常会引入小的插入或缺失，导致基因突变或失活（即敲除基因）。同源重组（HDR）：如果科学家在细胞中加入一个供体DNA模板，细胞可以利用模板进行精确修复。这使特定的碱基可以被替换或插入，达到精确编辑的目的（即敲入基因）。希望这篇文章能让你对CRISPR-Cas9基因编辑技术有一个清晰的认识！如果你有任何问题或想了解更多，欢迎在评论区留言哦！

一分钟搞懂基因过表达、敲低、敲除的区别嘿，大家好！今天咱们来聊聊基因操作里的三个常见术语：过表达、敲低和敲除。别担心，只需要一分钟，你就能搞懂它们的区别啦！基因过表达 𐟚€ 基因过表达，简单来说，就是把一个基因插到一个表达载体里，然后把这个载体转染到目标细胞里。这样一来，细胞就会大量表达这个基因和它编码的蛋白质。常见的载体有哺乳动物载体（用于人、小鼠等哺乳动物细胞）、原核载体（用于大肠杆菌等原核生物）和慢病毒载体（比如HIV、FIV、SIV、EIA）。构建这些载体的方法包括设计目的基因片段和载体、连接元件（用酶切或gateway连接），然后通过病毒载体、电穿孔或转染试剂导入目标细胞。基因敲低 𐟛‘ 基因敲低呢，主要是用抑制剂来抑制基因的表达。常见的方法有RNA干扰技术（RNAi）、CRISPR-Cas9技术和gene转染技术。比如，siRNA载体通过与目标mRNA互补结合序列，特异性地实现靶向mRNA降解。而CRISPR载体则包含CRISPR靶向序列和转录抑制子。构建这些载体的步骤包括设计干扰序列、合成和克隆、转化和筛选，最后通过病毒等途径导入目标细胞。基因敲除 ✂️ 基因敲除则是用含有已知序列的小DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，整合到受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。常见的载体有CRISPR/Cas9载体和TALENs载体。CRISPR/Cas9载体通过Cas9核酸酶和sgRNA靶向序列精确定位并靶向基因DNA序列，然后引入双链断裂点，完成基因敲除。而TALENs载体则包含特异性核酸酶和nuclease binding domain，通过切割靶向基因DNA序列，完成敲除和编辑。构建这些载体的方法包括设计和选择靶点、载体插入、转化和验证，最后通过病毒载体、电穿孔等方法导入目标细胞。总结 𐟓 总的来说，基因过表达、敲低和敲除这三种技术在生物学研究中有着广泛的应用。了解它们的原理和构建方法，可以帮助你更好地设计和执行实验。希望这篇文章能让你在短时间内对它们有个清晰的认识！如果你有任何问题或需要进一步的解释，欢迎在评论区留言哦！𐟘Š

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