当前位置：网站首页 » 新闻 » 内容详情

rnai引物设计网站下载_国产377vc精华真能祛斑吗(2024年12月最新版)

内容来源：东为网络所属栏目：新闻更新日期：2024-11-30

rnai引物设计网站

siRNA转染实验步骤及要点详解 siRNA转染步骤：以EpFed转染试剂转染siRNA/质粒于24孔板，siRNA浓度为50nM为例。 1）储存液准备：siRNA使用前瞬时离心，用RNase-free H2O或灭菌ddH2O配制成20/L储存液，分装保存，避免反复冻融（建议不超过5次）。 2）细胞接种：贴壁细胞：转染前24小时接种0.5 - 2㗱05个细胞，转染时细胞融合度为30 - 50%。（铺板时要将细胞消化完全混匀，避免细胞堆积生长）悬浮细胞：转染前24小时接种0.5 - 2㗱05个细胞，转染时细胞数量应在4 - 8㗱05/孔。 3）转染步骤： A. 用25 ⵌ Opti-MEM（或不含抗生素和血清的DMEM培养基）稀释1.25⵬ siRNA（20/L储存液）/500ng质粒，并用枪轻轻吹打3 - 5 次混匀，再加入1.0 ⵌEpFed转染试剂，用枪轻轻吹打3 - 5 次混匀，不可Vortex或离心。siRNA转染细胞的终浓度为50 nM，室温孵育20分钟。 B. 按照24孔板每孔25ⵌ转染试剂-siRNA/质粒混合物，均匀加入到24孔细胞板中，前后轻摇细胞板混合均匀。 C. 细胞板置于37℃、5% CO2培养箱中培养48-72小时。对于某些细胞对EpFed转染试剂比较敏感，可以在转染后4-6小时更换细胞培养液，转染效率无显著影响。 4）效果检测：转染完成后48-72小时均可进行沉默/过表达效果检测，最佳检测时间与细胞类型、转染试剂、检测目的等相关。 siRNA基因沉默效率的常见测定方法和注意事项： QPCR检测：优先推荐QPCR检测RNA水平的沉默效果，推荐在24h到48h检测，可适当调整。QPCR检测沉默效果时，在设计引物时最好是将引物设计在沉默位点（靶序列）的两侧，而不是在同侧。因为RNAi引起的沉默是先进行mRNA的切割之后造成mRNA的降解。另外，即使设计在两侧，也不要离沉默位点（靶序列）太远的地方，不然可能会造成对沉默效果的低估。 WB检测：WB检测蛋白水平的沉默效果，一般在转染后48h到72h间提蛋白检测蛋白水平的沉默效果，检测时间跟目的蛋白的半衰期也有关系，具体的时间需要设计时间梯度，一般理想的是在72h最明显。

circRNA实验全解 𐟔 实验原理在组织或细胞中提取的total RNA通常包含多种RNA。为了准确分析circRNA，首先需要去除样本中的核糖体RNA和poly-A RNA干扰，然后用RNase酶消化掉线性RNA，从而使circRNA富集。 𐟓Š 实验目的从总RNA中富集circRNA，采用Northern blot和特异的PCR进行验证，并对circRNA的成环特性进行评估。 𐟧ꠥꌦ料 RNA提取试剂盒核糖体RNA去除试剂盒 PolyA结合磁珠 RNAaseR试剂盒放线菌素D Northern blot试剂盒发散引物RT-PCR 𐟓 实验步骤 4.1 RNA提取样品处理组织样品：加入400ul Trizol溶液到装有绿豆大小组织块的EP管中，利用电动组织匀浆器在冰上充分匀浆1-2min，后放置室温充分裂解10min。细胞样品：12孔板细胞弃去上清，每孔加入600ul Trizol溶液。先在冰上裂解15-20min，再用1ml移液枪吹打液体充分裂解贴壁细胞，后将液体转移到RNasefree EP管中。 RNA提取按1:5比例，在Trizol溶液中加入氯仿，手动充分摇匀混合液20-30s，室温放置10min。 4度1200g离心10min，小心转移上层透明液体到EP管中。按异丙醇与Trizol溶液比例为1:2加入异丙醇，上下颠倒混匀液体，室温放置10-15min。 4度1200g离心10min，弃去上清，可见羽毛状RNA沉淀于管侧底部。按等比例加入75%乙醇，温和地悬浮RNA沉淀。 4度7500g离心5min，尽量吸除上清，室温晾干5-10min。用20ul RNase free dH20溶解RNA，测浓度后-80度保存。总RNA定量 RNA在260nm波长处有最大吸收峰，可通过测定RNA样品的OD260和OD280估算出RNA的含量和纯度。OD260值为1相当于40ug/ml单链RNA，该方法提取的RNA OD260/280值在0.8-2之间。 circRNA的预处理去除核糖体RNA和poly-A RNA 使用Invitrogen的核糖体RNA去除试剂盒RiboMinusTM Human/Mouse Transcriptome Isolation Kit（货号K1550-01）。通过磁珠法结合Poly(A)的RNA后剩余的RNA即为Poly(A)-RNA样品。 RNAaseR酶消化 RNase R是一类核糖核酸外切酶，能降解大部分线性RNA，但circRNA不易被RNase R酶消化降解。因此可以通过该实验鉴别circRNA和线性RNA。准备总RNA样品：提取细胞或组织的总RNA，测浓度后备用。 RNaseR反应体系：取5ug total RNA样品按下面体系准备消化。短暂旋转试管，添加5xFirst-StrandBuffer, 0.1MDTT, RNasin和SuperScriptM RT，轻轻移液并将反应液在25℃下孵育5分钟。在50℃下孵育60分钟，然后通过灭活反应在70℃加热15分钟。发散引物可以扩增circRNA，而不能扩增线性RNA。 𐟓š 参考文献 Chen et al. (2015). Isolation of non-polyadenylated and ribosomal-free RNAs from mammalian cells. Methods Mol Biol 1206, 69-80. Yang et al. (2016). Characterization of Circular RNA. Methods Mol Biol 1402, 215-227.

专栏内容推荐

474 x 192 · jpeg
RNAi的原理和载体构建 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

906 x 496 · jpeg
基因结构域（引物设计RNAi） - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

933 x 688 · jpeg
教程∣SiRNA设计从入门到精通，教会您如何筛选有效靶点！ - 技术前沿 - 资讯 - 生物在线
素材来自:bioon.com.cn
606 x 630 · png
circPrimer:环状RNA注释和引物设计工具-腾讯云开发者社区-腾讯云
素材来自:cloud.tencent.com

657 x 401 · png
Universal ProbeLibrary在线引物设计--3步带你搞定qPCR引物设计（物种齐全） - 哔哩哔哩
素材来自:bilibili.com
720 x 388 · png
基因结构域（引物设计RNAi） - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

640 x 390 · jpeg
RNAi实验成功的秘诀
素材来自:ibsbio.com
1080 x 848 · jpeg
掌握这两款软件，让点突变引物设计简单到飞起！_序列
素材来自:sohu.com

574 x 419 · jpeg
掌握这两款软件，让点突变引物设计简单到飞起！ - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
640 x 644 · jpeg
一键完成microRNA定量PCR引物设计
素材来自:sohu.com

357 x 349 · jpeg
RNAi全套服务（siRNA设计，siRNA载体构建，siRNA订制等）-分子生物学服务 -技术服务-生物在线
素材来自:bioon.com.cn
428 x 563 · jpeg
RNAi的原理和载体构建 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

786 x 492 · jpeg
零基础SCI绘图（18）RNAi实验出图之实验篇 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
748 x 652 · png
m6A RNA甲基化免疫沉淀实时荧光定量PCR(MeRIP-qPCR)实验中引物如何设计_艾维缔科技怀来有限公司官网
素材来自:ivdshow.cn

600 x 547 · jpeg
同源重组构建载体-引物设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
1146 x 717 · jpeg
2022年最受研究者欢迎的7款引物设计在线工具 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

1080 x 668 · png
RNAi药物设计25年：从发现到临床上市，从诺贝尔到多适应症医药新闻-ByDrug-一站式医药资源共享中心-医药魔方
素材来自:bydrug.pharmcube.com
2070 x 327 ·
果蝇Cullin 5基因dsRNA设计及RNAi效率检测_参考网
素材来自:fx361.com

1080 x 596 · png
RNAi药物设计25年：从发现到临床上市，从诺贝尔到多适应症医药新闻-ByDrug-一站式医药资源共享中心-医药魔方
素材来自:bydrug.pharmcube.com

3438 x 4675 · png
修饰引物探针系列详解—DEL引物 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
565 x 452 · jpeg
怎么用primer-blast设计一段已知序列的引物？ - 知乎
素材来自:zhihu.com

1080 x 468 · png
RNAi药物设计25年：从发现到临床上市，从诺贝尔到多适应症医药新闻-ByDrug-一站式医药资源共享中心-医药魔方
素材来自:bydrug.pharmcube.com

1080 x 603 · png
PCR引物如何设计-腾讯云开发者社区-腾讯云
素材来自:cloud.tencent.com

2160 x 1274 · png
NCBI引物设计、检验引物特异性、检索基因序列、BLAST_ncbi引物特异性验证-CSDN博客
素材来自:blog.csdn.net
1080 x 646 · png
RNAi药物设计25年：从发现到临床上市，从诺贝尔到多适应症医药新闻-ByDrug-一站式医药资源共享中心-医药魔方
素材来自:bydrug.pharmcube.com

873 x 250 · gif
RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体图谱质粒图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等基本信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com

670 x 153 · png
3分钟，get√ RNAi技术！_友谊中联生物科技有限公司
素材来自:biofriend.com.cn

684 x 500 · png
pcr引物设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
922 x 597 · jpeg
荧光定量PCR完整实验流程（含引物设计和预实验）
素材来自:protocols.mushroomlab.cn

1024 x 768 · jpeg
RNA interference (RNAi). - ppt download
素材来自:slidesplayer.com
519 x 388 · gif
RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体图谱质粒图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等基本信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com

865 x 1129 · png
科学网—[转载]使用亲脂性偶联物将 RNAi 疗法扩展到肝外组织 - 李海超的博文
素材来自:blog.sciencenet.cn
640 x 434 · jpeg
引物设计软件_干货｜技能篇之分子生物学常用小软件分享-CSDN博客
素材来自:blog.csdn.net

731 x 184 · jpeg
一文搞懂！手把手教你精通各类引物设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

830 x 581 · png
pcr引物设计 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

素材来自:查看更多內容

当前用户设备UA：Mozilla/5.0 AppleWebKit/537.36 (KHTML, like Gecko; compatible; ClaudeBot/1.0; +claudebot@anthropic.com)