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定量引物设计网站新上映_引物设计的软件有哪些(2024年11月抢先看)

内容来源：东为网络所属栏目：导读更新日期：2024-11-29

定量引物设计网站

如何设计qPCR引物：实用指南大家好！今天我们来聊聊如何设计qPCR（定量PCR）的引物。其实，qPCR的引物设计和普通PCR差别不大，都可以用NCBI来方便地设计。不过，由于qPCR鉴定的是mRNA的表达，所以在设计引物时需要特别注意以下几点：第一步：打开NCBI 首先，打开NCBI（美国国立生物技术信息中心）网站，搜索你需要的基因（例如Lepr）。第二步：找到基因卡片点开基因卡片，找到最下方的mRNA和Protein描述。根据你的需求选择合适的Isoform，然后复制NM码。第三步：进入引物设计页面在NCBI的引物设计（Primer design）栏目输入刚才复制的NM码。我个人更喜欢下载cDNA文件，然后用SnapGene手动拉取引物，这样可以直接看到cDNA序列，更加直观。第四步：确认引物CG值在SnapGene中确认引物的CG值（大约50%），Tm值在60度左右。可以多设计几对引物，以防有些引子不工作。希望这些小技巧能帮到大家，祝科研顺利！𐟒ꀀ

[火焰]实验检测之RT-PCR检测[火焰] RT-PCR实验检测介绍实时荧光PCR（real-time PCR），属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相对定量。可检测mRNA，microRNA，lncRNA和DNA水平的基因拷贝数变化。服务流程 1、引物设计与合成 2、DNA/RNA抽提 3、反转录（针对RNA） 4、上机定量分析客户提供 1、全血、组织或细胞。 2、引物，或由丰核提供。 3、基因信息：目的基因名称、物种和序列（或GenBank Accession Number）。#伊莱博生物#

qPCR原理详解：实时荧光定量PCR 大家好，今天我们来聊聊qPCR（定量多聚酶链式反应）的原理。最近有点抑郁，加上药物作用，每天睡12小时，实在没精力更新。不过还是感谢大家的支持，下周有流式实验，到时候会拍操作界面的照片给大家详细讲解。 qPCR和传统PCR的主要区别在于检测方式。传统PCR只是对基因进行扩增，而qPCR则是实时检测底物的荧光强度来判断mRNA的表达量。这就引入了一个重要的概念：Ct值。在qPCR中，基因的表达与荧光强度并不是线性关系，而是指数级增长（因为DNA的扩增是2^n次方）。因此，在某个循环时，荧光强度会达到一个阈值。当荧光强度超过这个阈值时，我们认为是高表达。到达这个阈值需要的循环数越少，基因的表达量就越高。这就是图2中曲线含义的解释（图片来源：Merck）。有人可能会问，既然是mRNA的表达量，为什么说是DNA的扩增呢？这就要提到mRNA和cDNA的概念。空气中存在RNA酶，所以RNA在正常条件下极不稳定。即使是RNA-seq，也需要将RNA逆转录为cDNA。在生物学中，我们一般认为这两者的表达是一致的。篇幅有限，下次再讲操作流程（RNA提取和引物设计等）。感谢大家的支持。

医学科研实验室全解析：从细胞到基因医学科研实验室的服务范围广泛，涵盖了从细胞到基因的多个层面。以下是实验室提供的部分服务项目： 𐟐�Š觉驀模：包括大小动物手术模型、药物诱导模型等，提供行为学检测、影像检测、生化生理指标检测等服务。 𐟧젧𛆨ƒž实验：服务项目包括细胞培养、细胞爬片、细胞转染、流式细胞术、慢病毒包装、细胞划痕实验、细胞迁移、细胞侵袭、稳定株筛选、原代细胞分离等。 𐟔젧—…例学检测：提供硬组织切片、不脱钙切片、脱钙、软化、包埋、切片、染色、特殊染色、免疫组化、免疫荧光、病理图像采集等服务。 𐟌 分子生物学检测：包括荧光定量PCR服务、miRNA检测、DNA定量、甲基化测序、质粒提取、质粒构建、菌种鉴定、引物设计合成等。 𐟒ᠨ›‹白相关检测：服务项目有Western Blot、蛋白质纯化、蛋白质双向电泳、单克隆抗体制备、原核表达、免疫沉淀、免疫共沉淀、SILAC标记定量蛋白质组学等。 𐟓ˆ 快速检测服务：提供ELISA检测、生化检测、组织样本匀浆等服务。 𐟌 组学服务：涵盖基因组学、转录组学、单细胞测序、蛋白质组学、代谢组学等。这些服务项目涵盖了医学科研的多个领域，为科研人员提供全面的技术支持。

动物实验与病理染色服务全攻略 𐟔젥Š觉饮ž验服务 WB检测（全膜）抗体费用引物设计 RT-PCR实验 RNA提取及反转 RT-PCR检测 microRNA PCR RNA提取 PCR检测基因组DNA提取载体构建基因型鉴定双荧光素酶实验 𐟔젧—…理染色服务包埋切片免疫组化操作免疫组化抗体费用拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描免疫组化软件分析免疫荧光（单标）免疫荧光（双标）免疫荧光（三标）单标抗体费用全景扫描（单标）全景扫描（双标）全景扫描（三标）免疫荧光软件分析透射电镜透射电镜分析电镜扫描电镜扫描电镜分析 OCT包埋冰冻切片 ATP染色 ATP染色拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描 Tunel检测荧光拍照全景扫描软件分析 FISH（探针自备） FISH（单标）检测荧光拍照全景扫描 HE染色 HE染色拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描 HE分析 masson染色 masson染色拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描 masson软件分析 Von kossa染色 Von kossa染色拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描定量分析 PAS染色 PAS染色拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描 PAS软件分析 Ab-PAS染色 AB-PAS染色拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描 AB-PAS软件分析阿利新蓝（AB)染色阿利新蓝（AB)染色拍照（2个倍数，3个视野）全景扫描

PCR实验Ct值：扩效关键在荧光定量PCR实验中，Ct值的分析至关重要。PCR扩增效率（En）是评估实验结果的关键参数，表示聚合酶将待扩增的DNA分子转变为扩增子的效率。正常情况下，1个DNA分子转变为2个DNA分子的扩增效率为100%。En的正常范围通常在90%-110%之间，超出此范围可能影响Ct值的准确性。影响En的因素有很多，包括但不限于： 𐟔젥应条件：温度、时间等。 𐟧젥𜕧‰騮𞨮᯼š特异性、浓度等。 𐟧ꠥꌧŽ異ƒ：污染、仪器性能等。在决定是否外包实验前，许多人会担心成本问题，但实际上，外包实验的优势不容忽视： 1️⃣ 时间缩短：外包团队通常拥有更高效的实验流程，可以大大缩短实验时间。 2️⃣ 数据可靠性：外包团队通常具备更专业的实验设备和经验，能够确保数据的真实可靠性。 3️⃣ 持续支持：外包团队不仅提供实验服务，还能提供持续的科研支持，帮助研究人员更好地理解和分析实验结果。选择合适的团队进行实验外包，不仅可以显著降低科研成本，还能提升SCI发表速度，从而申请更多经费，实现晋升加薪的良性循环。实验外包的普及并非没有原因，只要选择得当，外包实验可以成为科研工作中的有力助手。

𐟧접PCR的魔法原理揭秘 ✨ 𐟔 你是否好奇QPCR是如何运作的？今天，我们就来揭开这个神秘的面纱！ 𐟌᯸ PCR，即聚合酶链式反应，是一种以DNA为模板，在DNA聚合酶的帮助下，体外合成DNA并不断扩增的过程。而QPCR，即定量PCR，是在PCR体系中加入了荧光染料或荧光探针，通过实时检测荧光信号来监测PCR进程。 𐟒᠑PCR的原理是这样的：在PCR反应中，随着DNA的复制和扩增，荧光信号会逐渐增强。通过检测这个荧光信号的变化，我们可以知道DNA的复制情况，从而对模板进行定量的分析。 𐟓 QPCR的流程包括：RNA提取、逆转录、引物设计、选择内参、模板用量和对照设置等步骤。每一个步骤都至关重要，确保了实验的准确性和可靠性。 𐟌Ÿ 通过QPCR，我们可以更精确地了解基因的表达情况，为生物研究和医学诊断提供了强大的支持！现在，你是不是对QPCR有了更深入的了解呢？

𐟧쒔-qPCR实验室全攻略✨ 𐟔젒T-qPCR，你get了吗？这是分子生物学中的大热门哦！今天，就让我们一起探索它的神秘世界吧～ 𐟒ᠪ*操作指南**： 1️⃣ **引物设计**：引物是RT-qPCR的灵魂，要遵循一般设计原则，并确保产物长度在80-150bp之间，这样扩增效率更高哦！ 2️⃣ **Mix配制**：根据MasterMix、模板和引物的不同进行优化，达到最佳反应体系。注意，MasterMix不要反复冻融，且冰上操作是关键！ 3️⃣ **实时检测**：在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号来实时检测。这样，我们可以看到每一个循环的荧光值变化，从而判断扩增情况。 4️⃣ **数据分析**：RT-qPCR的数据分析包括相对定量和绝对定量两种方法。相对定量用于检测实验组和对照组中一个靶基因的倍数差异；而绝对定量则是通过标准曲线来得到目的基因的量。 𐟎‰ **小贴士**： - 实验过程中要严格遵守无菌操作原则，确保实验结果的准确性。 - 每个样品至少设置3个平行孔，以减少误差。 - 在数据分析时，要选择合适的软件和算法，以确保结果的可靠性和准确性。 𐟚€ 现在，你是不是对RT-qPCR有了更深入的了解呢？快来试试吧，相信你一定能够成为RT-qPCR的大师！

𐟔젒T-PCR实验全攻略：从原理到实践 𐟓š 目录 cDNA与反转录 RT-PCR原理与目的 RNA抽提与质量检测反转录过程 PCR程序与引物设计 PCR酶与体系 PCR产物检测实时荧光定量PCR（RT-qPCR）常见问题与注意事项 𐟔젣DNA与反转录 cDNA（互补DNA）：与RNA链互补的单链DNA。在适当引物的存在下，由DNA聚合酶即反转录酶合成的单链DNA就是cDNA。反转录（Reverse Transcription）：在反转录酶的作用下，以RNA为模板合成DNA的过程。合成的DNA链称为与RNA互补的DNA，即cDNA。 𐟔젒T-PCR原理与目的原理：RT-PCR全称反转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction），将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。目的：检测核酸的表达，主要是RNA的表达。DNA不需要反转录的过程，直接PCR检测即可。 𐟔젒NA抽提与质量检测 RNA抽提方法：TRIzol法。主要成分包括苯酚，用于裂解细胞和变性蛋白。 RNA质量检测：分光光度计测定、凝胶电泳法。 𐟔젥转录过程以RNA为模板合成cDNA的过程。在这个过程中，遗传信息的流动方向与转录时相反，因此称为“反转录”。需要反转录酶，合成的DNA称为与RNA互补的DNA（cDNA）。根据不同情况选择不同的反转录引物。 𐟔점CR程序与引物设计 PCR程序：三步法，包括变性、退火和延伸三个基本反应。引物设计：找到目的基因的CDS序列，用软件设计和评价引物，并使用BLAST进行引物特异性检测。引物长度为15-30bp，最常用的为23bp；引物Tm值介于62-73℃之间，上下游引物Tm最好相近以保证其能高效工作；3'-端的Tm值要低于5'端；引物GC含量约为40-60%；避免扩增模板的二级结构域；避免引物的二级结构；避免与靶DNA错配。 𐟔점CR酶与体系 PCR酶：可选择普通的Taq酶、可扩增长片段的Taq酶或高保真酶。 PCR体系：按所选的PCR酶说明书来配制。 𐟔점CR产物检测一般采用琼脂糖凝胶电泳，必要时也可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳。 𐟔젥—𖨍祅‰定量PCR（RT-qPCR）基本原理：在PCR体系中加入能够指示DNA片段扩增过程的荧光染料或荧光标记的特异性探针，通过对PCR过程中产生的荧光信号累积或荧光标记的特异性探针释放的荧光信号进行监测和记录，实时监测整个PCR进程，再结合软件对获得的荧光信号数据进行分析，计算待测样品中特定DNA片段的初始量。扩增过程：包括荧光背景信号阶段、荧光信号指数增加阶段和荧光信号平台期阶段。常见问题与注意事项：在进行RT-PCR实验时，需要注意实验条件的选择、引物的设计、RNA的质量控制以及实验操作的规范性等问题，以确保实验结果的准确性和可靠性。

单基因携带者筛查的三大关键技术在分子生物学领域，单基因携带者的筛查至关重要，它涉及到一系列先进的检测技术。以下我们将详细介绍三种主要的方法：聚合酶链反应（PCR）𐟔슐CR 是一种强大的分子生物学技术，专门用于放大特定的 DNA 片段。通过设计针对特定基因的引物，可以在体外进行 DNA 扩增。实时荧光定量 PCR 是其衍生技术之一。 PCR 的应用非常广泛，例如，它可以用于检测囊性纤维化等单基因病的相关基因突变。通过分析扩增产物的大小和序列，可以确定是否存在突变。PCR 的灵敏度高、特异性强，操作相对简单，能够快速检测已知的特定突变。然而，它只能检测有限的突变位点，对于新的或未知突变可能无法检测。桑格测序（Sanger sequencing）𐟧슦ᑦ 𜦵‹序是一种经典的基因检测方法，通过在 DNA 合成反应中加入不同的双脱氧核苷酸，使合成反应在不同位置终止，从而产生不同长度的 DNA 片段。这些片段通过电泳分离后，可以读取序列。桑格测序的准确性高，是基因检测的“金标准”，能够检测已知和未知的突变。然而，它的成本相对较高，通量较低，不适合大规模筛查。在进行遗传性耳聋基因筛查时，桑格测序可以确定常见的耳聋相关基因是否存在致病突变。下一代测序（NGS）𐟌 NGS 技术包括全基因组测序（WGS）、全外显子组测序（WES）和目标区域测序等。NGS 技术能够同时对大量的 DNA 片段进行测序，产生海量的测序数据。在单基因携带者筛查中，WES 和目标区域测序较为常用。它们可以检测多个基因的多种突变类型，包括点突变、插入/缺失、拷贝数变异等。NGS 的高通量和广检测范围使其能够同时检测多个基因，但数据分析复杂，需要专业的生物信息学分析能力。成本相对较高，对于某些低频突变的检测灵敏度可能较低。基因芯片技术𐟒𛊥𞮩˜𕥈—芯片是一种将大量已知的 DNA 探针固定在芯片表面，与待测样本中的 DNA 进行杂交的技术。通过检测杂交信号的强度和模式，可以确定样本中是否存在特定的基因突变。微阵列芯片可用于单基因携带者筛查，例如检测地中海贫血、脆性 X 综合征等常见单基因病相关基因的突变。它可以同时检测多个基因的多个突变位点，通量较高，操作相对简单。然而，它只能检测已知的突变，对于新的或罕见突变可能无法检测。这些技术各自有其优势和局限性，在实际应用中，需要根据具体需求选择合适的方法。