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设计grna网站新上映_grna scaffold(2024年11月抢先看)

内容来源：东为网络所属栏目：导读更新日期：2024-11-28

设计grna网站

biorxiv 𐟓… 分享一个上个月在BioRxiv上发表的CRISPR knockin协议。这个协议从gRNA设计、同源臂设计、克隆到编辑和选择都有详细的指导。最棒的是，作者优化了一系列的质粒，包括各种荧光标签、表位标签和TurboID。这些质粒设计了许多实用的酶切位点，方便根据需要进行替换和选择标记。这些质粒都可以在Addgene上直接购买。简直不要太方便！ 𐟔砦„Ÿ谢Pelletier实验室，这对没有Knockin经验的学生来说真的是福音。如果你有Knockin的需求，强烈推荐看看这个协议。我自己还没用，等过一个月再来分享实际使用的感受！ 𐟓Š 协议的主要步骤包括：设计gRNA和同源臂克隆质粒细胞培养验证和选择 𐟛 ️ 具体操作包括：使用QIAGEN Plasmid Plus Midikit提取高质量的质粒DNA。通过PCR扩增qTAG cassette，并使用Gibson Assembly进行四片段组装。将组装好的质粒转入细菌中进行扩增，并使用QIAquick Gel Extraction Kit纯化质粒。将纯化后的质粒转入细胞中进行编辑，并通过PCR和测序验证编辑结果。 𐟓š 这个协议不仅提供了详细的步骤，还解释了每个步骤的目的和注意事项。无论你是初学者还是有一定经验的科研人员，这个协议都能帮助你顺利完成CRISPR Knockin实验。

CRISPR筛选引领遗传干扰研究的新浪潮

《微生物学报》2024年9期出版

代投sci文章

CRISPR/Cas9攻略，科研必备！听说大年三十还在刷科研帖的朋友，来年实验都会顺利哦！𐟎‰ 一、实验原理基因敲除：CRISPR/Cas9系统通过Cas9酶切割靶基因组，形成DNA双链断裂。通常情况下，细胞会通过非同源末端连接（NHEJ）方式修复断裂的DNA，修复过程中可能发生碱基插入或缺失，导致移码突变，从而使靶标基因失去功能，实现基因敲除。基因敲入：CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列，进行切割。sgRNA识别并结合目标基因的靶向序列，形成RNA-DNA杂交，激活Cas9酶。Cas9酶作为DNA剪切酶，相对准确地切割目标DNA序列，donor DNA通过同源重组（HDR）将外源基因整合到切割位点，实现对基因组的编辑。二、实验步骤设计sgRNA：根据实验需求设计合适的sgRNA序列。合成sgRNA：将设计好的sgRNA序列进行合成。表达Cas9和sgRNA：将Cas9和sgRNA进行表达，通常通过载体进行。切割目标基因：利用Cas9酶切割目标基因序列。筛选单克隆：通过筛选获得含有编辑基因的单克隆细胞。基因编辑结果验证：对基因编辑结果进行验证，确认编辑成功。通过以上步骤，你可以实现对基因组的精准编辑，为科研实验提供有力支持。𐟔찟’က

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