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쥼物设计全攻略✨ 打开PubMed网站,点选NIH,开始你的基因探索之旅! ᠩ择“Gene”,输入你心仪的目的基因,比如mouse、rat或human哦~ 点击基因名字,进入下一步,别急! 点击NCBI,连接世界基因库,轻松获取信息。 在mRNA and protein区域,找到并点击第一个序号。 𛃄S,进入关键步骤,别错过! 复制棕色序列,一定要全部复制,这是关键数据哦! 打开生工网站,选择技术服务-常规引物合成,开始你的引物设计之旅! 寸 点击在线生成引物,选择SYBR,让引物设计更精准。 选择物种,输入基因名称,粘贴刚才复制的序列,提交你的设计! 在引物设计列表中查看已提交的序列,等待奇迹出现吧!
𑠥騮᥅覔导从理论到实践! 引物设计的基本原则 选择目的基因的共有外显子区域进行设计。 引物长度建议在20到25bp之间,GC含量保持在40%到60%,Tm值最好在60℃左右。 设计引物时,尽量跨越外显子,上下游引物可以位于不同的外显子上。 引物的self complementarity和self 3' complementarity相加值应不超过8,单个值不超过5。 扩增产物长度建议在80到300bp之间,最佳为80到150bp。 避免设计含有4个或以上相同碱基(如AAAA、TTTT、GGGG、CCCC)的引物,以及避免明显的二级结构。 设计流程 寸 使用NCBI在线设计工具: 进入NCBI网站,搜索目的基因(如GAPDH)。 查看详细信息,找到共有外显子区域。 选择转录本信息,查看外显子位置。 进入引物设计页面,填写相关信息。 设置引物参数,如PCR产物大小、跨越外显子等。 点击“Get Primers”获取引物序列。 结果解读 在Graphical view of primer pairs部分查看每对引物跨越外显子的情况。 在Detailed primer reports部分查看引物质量和匹配情况。 通过以上步骤,你就可以轻松完成引物设计啦!
PCR技术全解析:从基础到实践 大家在做荧光定量PCR实验时,是不是经常感到困惑?今天我来给大家分享一些PCR的干货,帮助你们更好地理解这项技术! ➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖➖► 1️⃣ PCR是什么? PCR全称是聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),是一种非常强大的技术。它可以通过简单高效的方法复制DNA,就像是生物体外的特殊DNA复制。PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。 2️⃣ PCR是怎么完成扩增的? 通常一次PCR反应进行30-35个循环,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。是不是很神奇? 3️⃣ PCR实验原理图? 抱歉,这部分内容有点复杂,建议大家可以查阅一些专业的教科书或者在线教程,那里有更详细的解释。 4️⃣ 实验前需要准备什么? 在进行PCR实验前,你需要准备一些关键的工具和材料。比如,DNA聚合酶一般分为普通的Taq聚合酶和高保真性聚合酶。如果你只是想判断PCR产物是否存在特异性序列,普通的Taq聚合酶就足够了;但如果你想要得到没有任何突变的PCR产物,那就需要选择高保真聚合酶。需要注意的是,高保真的聚合酶所得的产物是没有A末端的,因此在T载体连接之前需要进行加A反应。或者直接选用普通的Taq聚合酶也可以。 5️⃣ PCR实验步骤是什么? PCR实验的步骤其实并不复杂,但需要一定的耐心和细心。具体的步骤包括:准备模板、设计引物、进行PCR反应、电泳检测等。如果你对某个步骤有疑问,可以在评论区告诉我哦~ 希望这些信息能帮到你们,祝大家在PCR实验中取得好结果!ꀀ
qPCR内参基因跑不齐?可能原因在这里! 最近在做qPCR的时候,总是遇到内参基因能跑出来,但目的基因却怎么也跑不出来的情况。CT值要么特别高,要么直接显示“undetermined”。换了几次引物还是不行,真是让人头疼。有没有哪位大佬能帮我解答一下这个问题? 内参基因与目的基因的差异 슊首先,内参基因和目的基因在PCR反应中扮演着不同的角色。内参基因通常用来校正实验条件,确保实验数据的可靠性。而目的基因则是我们真正关心的,希望通过PCR扩增来检测其表达水平。 实验条件的影响 ꊊ有时候,内参基因跑不齐可能是因为实验条件的问题。比如,PCR反应的退火温度、引物的设计、模板的质量等都会影响PCR的结果。你可以尝试调整这些参数,看看是否能改善情况。 引物设计的问题 引物设计是PCR实验的关键步骤之一。如果引物设计不合理,可能会导致目的基因无法有效扩增。你可以尝试使用不同的引物序列,或者使用在线工具进行引物设计优化。 实验操作中的误差 늊实验操作中的误差也可能导致内参基因跑不齐。比如,加样时的误差、PCR仪的温度控制不稳定等。你可以尝试在实验过程中更加仔细,或者使用自动化设备来减少人为误差。 数据分析的问题 最后,数据分析也可能导致误解。比如,CT值的计算方法、数据的标准化处理等。你可以尝试使用不同的数据分析方法,看看是否能得到更可靠的结果。 希望这些建议能帮助你解决qPCR内参基因跑不齐的问题!如果你还有其他疑问,欢迎随时交流讨论。加油!ꀀ
챐CR引物设计全攻略✨ 想要进行qPCR实验,却对引物设计感到迷茫?别担心,我们为你提供了全面的引物设计指南! 首先,选择合适的引物长度,通常18-30个核苷酸为最佳。确保引物的熔化温度(Tm)在65Ⱒ和75℃之间,并尽量保持差异在5℃以内。 訮物时,避免选择具有同源性的序列,这样可以减少自身二聚体或引物二聚体的形成。同时,尽量避免运行4个或以上单碱基或二核苷酸重复序列,以保持引物的特异性。 ᠥ楤,对于克隆实验,建议将小柱纯化作为最低纯化标准;若用于诱变实验,则应将不匹配的碱基置于引物的中间位置。 젦后,利用在线引物设计工具进行验证,如金斯瑞生物科技的引物设计工具,输入DNA序列即可轻松得到所需引物。 现在,你已经掌握了qPCR引物设计的全部要点,赶快开始你的实验吧!记得在实验过程中保持严谨,确保数据的准确性哦!
줸引物法轻松鉴定拟南芥突变体 𑠦南芥突变体的鉴定,三引物法来帮忙! 1️⃣ 引物选择是关键: - LR引物:位于T-DNA插入位点两侧,一个代表左,一个代表右。 - RP引物:也位于T-DNA两侧,与LR不同,它代表中间区域。 - BP引物:特指T-DNA区段上的引物,相当于从中间开始扩增。 2️⃣ 突变体类型一扩便知: - 野生型:扩增出大片段。 - 杂合体:扩增出一大一小两个片段。 - 纯合突变体:仅扩增出小片段。 3️⃣ BP引物选择小技巧: - 常用引物有LBa1、LBb1和LBb1.3,其中LBb1.3效果最佳哦! 4️⃣ 设计LP和RP引物: - 使用在线工具,输入突变体名称,轻松获取引物序列。 5️⃣ PCR扩增与凝胶电泳分析: - 以750bp为参照,通过凝胶电泳分析扩增结果,轻松判断突变体类型。 三引物法,让你轻松鉴定拟南芥突变体,科研更高效!
生工PCR引物订购全攻略 嘿,大家好!今天我们来聊聊如何在生工订购PCR引物。这个过程其实挺简单的,但为了确保大家不踩坑,我会详细讲解一下。 订购前的准备工作슩斥 ,你得知道你要订购的基因序列。生工提供了多种引物类型,比如常规引物、NGS引物等等。记住,正链和反链是要分开订购的哦! 如何添加引物到购物车 这个步骤有点关键。你需要在生工的网站上找到“在线订购”部分,然后选择“添加引物”。接下来,你会看到一个页面让你输入引物的相关信息,比如名称、序列等等。填完这些信息后,点击“确定”,引物就会被添加到你的购物车里了。 购物车管理 如果你还想继续添加其他引物,可以在弹出的提示中选择“取消”,然后继续添加。全部添加完成后,选择“确定”并去结算。这里要注意的是,计量单位为OD时只支持干粉交付方式哦! 结算和支付𐊥訴騽橡⯼你可以看到所有引物的详细信息,包括单价、总价等等。确认无误后,选择“去结算”,然后按照提示完成支付。支付成功后,你的订单就正式生成了。 其他注意事项⚠️ 在订购过程中,如果有任何问题,可以随时联系生工的客服。他们会很乐意帮你解决问题。另外,记得查看积分优惠券,有时候可以省下不少钱哦! 好了,这就是在生工订购PCR引物的全部流程。希望对大家有所帮助!如果有任何问题,欢迎留言讨论!退
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